異議申立番号 異議2022-701212
特許権者 キリンホールディングス株式会社（代理人 弁理士3名）
特許異議申立人 〔氏名省略〕
特許第７０８１９０５号発明「ビールテイスト発酵アルコール飲料およびその製造方法」の特許異議申立事件について、次のとおり決定する。
結 論
特許第７０８１９０５号の請求項１ないし９に係る特許を維持する。
理 由
第１ 手続の経緯
特許第７０８１９０５号（以下、「本件特許」という。）についての出願は、平成２９年６月２日（優先権主張 平成２８年６月３日）に出願された特願２０１７－１０９６９２号に係るものであって、令和４年５月３０日にその特許権の設定登録（請求項の数９）がされ、同年６月７日に特許掲載公報が発行され、その後、その特許に対し、同年１２月６日に特許異議申立人 〔氏名省略〕（以下、「特許異議申立人」という。）より特許異議の申立て（対象となる請求項：請求項１ないし９）がされたものである。
第２ 本件特許発明
本件特許の請求項１ないし９に係る発明（以下、これらの発明を順に「本件特許発明１」、「本件特許発明２」などという場合があり、また、これらをまとめて「本件特許発明」という場合がある。）は、願書に添付された特許請求の範囲の請求項１ないし９に記載された事項により特定される次のとおりのものである。
「【請求項１】
麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料であって、該飲料が、大麦麦芽を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）のペプチド画分を含んでなり、飲料中の全タンパク量に対する前記ペプチド画分に含まれるペプチド量の比率が４．８％より大きく８．０％以下であり、かつ、飲料中の重合度５～１０のα－グルカンの濃度が７．１ｍｇ／ｍＬ以上１６．０ｍｇ／ｍＬ以下である、ビールテイスト発酵アルコール飲料。
【請求項２】
麦芽使用比率が５０％以上である、請求項１に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料。
【請求項３】
大麦麦芽を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）のペプチド画分を配合する工程と、重合度５～１０のα－グルカンを配合する工程とを含んでなる、ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法であって、前記ペプチド画分に含まれるペプチドを飲料中の全タンパク量に対して４．８％より大きく８．０％以下の比率となるように配合し、かつ、前記α－グルカンを飲料中において７．１ｍｇ／ｍＬ以上１６．０ｍｇ／ｍＬ以下の濃度となるように配合する、製造方法。
【請求項４】
前記ペプチドを含む原料から該ペプチドを調製する工程をさらに含んでなる、請求項３に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
【請求項５】
限外濾過法および硫安沈殿法により前記ペプチドを調製する、請求項４に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
【請求項６】
前記ペプチドを含む原料が、大麦麦芽あるいはその加工品である、請求項４または５に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
【請求項７】
前記ペプチドを含む原料が、大麦麦芽を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料である、請求項４～６のいずれか一項に記載のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造方法。
【請求項８】
分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）のペプチド画分および重合度５～１０のα－グルカンを有効成分として含んでなるビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善剤であって、前記ペプチド画分に含まれるペプチドを飲料中の全タンパク量に対して４．８％より大きく８．０％以下の比率となるように使用し、前記α－グルカンを飲料中の濃度で７．１ｍｇ／ｍＬ以上１６．０ｍｇ／ｍＬ以下となるように使用し、かつ、前記ペプチド画分および前記α－グルカンが大麦麦芽を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する、風味改善剤。
【請求項９】
分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）のペプチド画分および重合度５～１０のα－グルカンを添加する工程を含んでなる、ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善方法であって、前記ペプチド画分に含まれるペプチドを飲料中の全タンパク量に対して４．８％より大きく８．０％以下の比率となるように添加し、前記α－グルカンを飲料中の濃度が７．１ｍｇ／ｍＬ以上１６．０ｍｇ／ｍＬ以下となるように添加し、かつ、前記ペプチド画分および前記α－グルカンが大麦麦芽を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する、風味改善方法。」
第３ 特許異議申立理由の概要
特許異議申立人が申し立てた請求項１ないし９に係る特許に対する特許異議申立理由の要旨は、次のとおりである。
１ 申立理由１（甲第３号証を根拠とする新規性）
本件特許の請求項１～２に係る発明は、本件特許の優先日前に日本国内又は外国において、頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった下記の甲第３号証に記載された発明であり、特許法第２９条第１項第３号に該当し特許を受けることができないものであるから、それらの特許は、同法第１１３条第２号に該当し、取り消すべきものである。
２ 申立理由２（甲第４号証を根拠とする進歩性）
本件特許の請求項１～２に係る発明は、本件特許の優先日前に日本国内又は外国において、頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった下記の甲第４号証に記載された発明に基づいて、その優先日前に当業者が容易に発明をすることができたものであり、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから、それらの発明に係る特許は、同法第１１３条第２号に該当し、取り消すべきものである。
３ 申立理由３（実施可能要件）
本件特許の請求項１～９に係る特許は、下記の点で特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し、取り消すべきものである。
なお、申立理由３の具体的理由は、おおむね次のとおりである。
・酵素製剤が不明なので実施可能要件を満たさない。
本件特許発明は、「ビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーがあり、味の持続性が認められる、新しい香味を有するビールテイスト発酵アルコール飲料とその製造方法を提供すること」（段落【０００５】）を課題とし、１０～２０ｋＤａペプチド比率が４．８％以下である市販品（サンプル番号１～３）に対して、１０～２０ｋＤａペプチド比率を高くすることにより、課題を解決したものといえる。
そして、１０～２０ｋＤａペプチド比率を高くした飲料を得るための方法として、明細書の段落【００２２】の記載から、飲料中に含まれるタンパクのうち高分子側に属する１０～２０ｋＤａのペプチドの比率を高くするために、タンパク分解を抑制する条件となるように、飲料の製造条件を調整することにより本件特許発明の飲料を得ているものと推察される。
ここで、本件特許発明を実施するための条件の一例となる、明細書の試験醸造のビール４～８の製造条件についての段落【００６２】～【００６６】の記載から、上記サンプル番号４～８の試験条件と、１０～２０ｋＤａぺプチド比率の関係を確認するための表をまとめたので下記に示す。
〔図省略〕
第２段階の条件は同じであるので、工程の違いは第１段階の条件のみである。湯温が高く保持時間が長い試験醸造４の条件が、最も強い条件での処理といえそうだが、１０～２０ｋＤａペプチド比率はこれらの条件のうち中間の値である。そのため、湯温及び保持時間の条件と、１０～２０ｋＤａペプチド比率に相関があるようには読み取れない。
また、試験醸造６～８の工程の違いは本件明細書には示されていないので、同じ条件で３つの異なるロットの醸造品を得たと読み取れる。このことから、全く同じ製造条件であっても１０～２０ｋＤａペプチド比率は４．９～５．７％の範囲でばらつくものと考えられる。
この表（サンプル番号４～８の試験条件）から読み取れることは、糖化条件として、酵素製剤を投入して湯温６２～６５℃での処理を行い、７８℃での処理を行うと、１０～２０ｋＤａペプチド比率を４．９～５．７％の範囲にすることができる、ということである。
６５℃での処理を行うサンプル番号４、５のペプチド比率は、６２℃での処理を行うサンプル番号６～８の誤差範囲に含まれている。すなわち、３℃の差には工程上の有意差はない。
本件明細書には、従来公知の醸造品を製造する際の糖化条件は記載されていないので、この条件が従来の条件と異なるのか、従来の条件と比べてタンパク質分解を抑制する条件になっているのかは不明である。
上述したサンプル番号４～８において酵素製剤を使用して糖化を行う際の温度、時間を調整することで１０～２０ｋＤａペプチド比率を特定の範囲に調整した醸造品を得ているが、この工程で使用する酵素製剤が不明である。
酵素製剤がどの程度作用するかが、タンパク分解の抑制の程度に重要な影響を及ぼすことが本件明細書【００２２】及びサンプル番号４～８の試験結果から読み取れるところ、同じ糖化条件であっても酵素製剤の種類によってタンパク分解の抑制の程度が異なることは明らかであるので、当業者が本件特許発明を実施することができないのは明らかである。
そして、酵素製剤の種類によって、その活性が高くなる温度や処理条件が異なることは言うまでもない。本件の実施例で使用した酵素製剤と異なる酵素製剤を使用した場合には、湯温や処理条件を同じにしたとしても、１０～２０ｋＤａペプチド比率が４．８％以下となる可能性や８．０％を超える可能性がある。
全く同じ糖化条件で実施したと思われる試験醸造６～８の結果ではペプチド比率が４．９～５．７％の範囲でばらつくことから、タンパク分解の抑制の程度が多少大きくなる酵素製剤を使用した場合は、同じ処理条件であっても１０～２０ｋＤａペプチド比率が４．９％以下となることはあり得る。
そのため、酵素製剤が特定されていない本件明細書に記載された条件に基づき、当業者が本件特許発明を実施することができないのは明らかである。
・測定精度からみての実施可能要件違反
実施例の表８（本件明細書の【００８１】)を参照すると、１０～２０ｋＤａペプチド比率が４．８％である市販品１に対して、４．９％であるサンプル番号７において官能評価スコアが高いことから、本件特許発明は課題を解決できたとされている。
すなわち、本件特許発明が成立するためには、１０～２０ｋＤａペプチド比率を０．１％という細かい精度で測定できることが前提となるが、１０～２０ｋＤａペプチド比率を０．１％の精度で測定することができないので、当業者は本件特許発明を実施することができない。
甲第１号証は、発明の効果を裏付けるために、小数点第一位までという細かい数値を規定することが必要な場合は、その細かい数値を有意なものとして求められる程度に、測定方法が記載されていなければならない、ということを示している。
ここで、本件での１０～２０ｋＤａペプチド比率の測定方法は、本件明細書の【００７３】～【００７９】に記載された方法で求められる。
本件明細書の【０１１２】には、ゲル慮過画分（画分Ａ１～Ａ２）中のタンパク質として、non-specific lipid-transfer protein 1（以下、「ＬＴＰ１」と呼ぶ）が含まれることが開示されている。
本件明細書の【００５７】には「画分Ａ１のペプチドが分子量約１０～２０ｋＤａに分布し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳励上でも、画分Ａ１～Ａ２において、同様の分子量約１０～２０ｋＤａのペプチドが分布している」と記載されていることから、ＬＰＴ１は分子量約１０～２０ｋＤａに含まれているタンパク質として認識されていると推定される。
また、図８には、ＬＰＴ１のバンド１２、１３が示されている。図８の左側には分子量マーカーが示されており、これを基準とすると、バンド１２、１３は分子量１０ｋＤａと１５ｋＤａの中間よりもやや１５ｋＤａの側（１３ｋＤａ付近）に位置している。
［本件特許明細書の図８］
〔図省略〕
ここで、甲第２号証の第２０頁第５～８行には、ＬＰＴ１の分子量が９．７ｋＤａであることが示されており、ＬＰＴ１は分子量既知のペプチドである。
ＬＰＴ１の分子量は実際には９．７ｋＤａであるので本来であれば分子量１０～２０ｋＤａの範囲には含まれるべきではない物質である。しかしながら、ＬＰＴ１は分子量１０～２０ｋＤａの範囲に含まれるタンパク質として、１３ｋＤａ付近に測定されている。
この事実は、本件明細書に記載の方法では、正確に分子量１０～２０ｋＤａの範囲のペプチドの量が計測できていないことを示している。
そして、本件明細書に記載された方法で測定された分子量１０～２０ｋＤａのペプチドの量は、分子量１０～２０ｋＤａの範囲外にあるペプチドの量を含むことがあることを意味している。
９．７ｋＤａのペプチドであるＬＰＴ１が１３ｋＤａ付近に測定されるのであれば、分子量の測定誤差が少なくとも（１３／９．７）×１００－１００≒約３４％あるものと考えられる。
本件では、１０～２０ｋＤａペプチド比率の４．８％と４．９％の０．１％の差を有意なものとして測定できるかが間題となる。しかし、１０～２０ｋＤａのペプチド量を測定する前提となる分子量の測定誤差が約３４％もあるのであれば、その誤差は１０～２０ｋＤａペプチド比率の測定にもそのまま影響する。
そのため、１０～２０ｋＤａペプチド比率が４．８％と測定された場合の、３４％の誤差を考慮した実際の値は４．８×０．６６～４．８×１．３４、すなわち３．２％～６．４％となる。従って１０～２０ｋＤａペプチド比率が４．８％である場合と４．９％である場合は区別できない。そして、１０～２０ｋＤａペプチド比率０．１％の差を有意なものとして測定することができない。この状況は、甲第１号証として示した裁判例の状況と同様である。
仮に、ＬＰＴ１という分子量９．７ｋＤａのタンパク質が１０～２０ｋＤａのタンパク質として１３ｋＤａ付近に測定されるという、大きな誤差を含み得る測定条件によりペプチドの分子量が測定されているにもかかわらず、本件明細書に記載された測定方法により、１０～２０ｋＤａペプチド比率について正確に４．８％と４．９％の０．１％の差を有意なものとして測定できるということであれば、そのことが理解できる程度に、測定方法の詳細が明細書に記載されるべきであるが、本件明細書にはそのような説明は記載されていない。
従って、１０～２０ｋＤａペプチド比率を０．１％の精度で測定することができず、当業者は本件特許発明を実施することができない。
なお、本件明細書【０１１２】の記載から、ゲル濾過画分においても分子量が９．７ｋＤａのＬＰＴ１が１０～２０ｋＤａのタンパク質に分類されていることから、ゲル濾過による分子量の測定法でも測定誤差があり、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動による分子量の測定方法と同様に分子量の測定精度が低い。そのため、ゲル濾過による分子量測定と電気泳動による分子量測定の違いを考慮したとしても、依然としてペプチド比率０．１％の差を有意なものとして測定することはできない。
・「タンパク分解を抑制する条件」が不明
本件明細書には、酵素製剤を使用して糖化を行う際の温度、時間を調整することで１０～２０ｋＤａペプチド比率を特定の範囲に調整することが記載されている。そして、上記の参考表１で示したように、試験醸造６～８からは、同じ製造条件であっても１０～２０ｋＤａペプチド比率は４．９～５．７％の範囲でばらつくことが理解できる。
このように、製造時のばらつきが大きいことから、酵素製剤を使用して糖化を行う際の温度、時間を調整したとしても、当業者は１０～２０ｋＤａペプチド比率を０．１％単位で調整して、１０～２０ｋＤａペプチド比率が４．８％である飲料と４．９％である飲料を作り分けることができない。
本件明細書に記載された飲料の製造方法により、１０～２０ｋＤａペプチド比率について正確に４．８％と４．９％の０．１％の差を有意なものとして飲料を作り分けられるということであれば、そのことが理解できる程度に、飲料の製造方法の詳細が明細書に記載されるべきであるが、本件明細書にはそのような説明は記載されていない。
従って、１０～２０ｋＤａペプチド比率を０．１％の精度で制御して飲料を製造することはできず、当業者は本件特許発明を実施することができない。
また、本件明細書【００２２】には、「タンパク分解を抑制する条件」を採用することにより１０～２０ｋＤａのペプチドの比率を高くすることが記載されているが、本件明細書中には「タンパク分解を抑制する条件」がどのような条件であるのかが記載されていない。
ここで、申立理由１の「新規性」の項目で対比する甲第３号証の実施例１に記載されている糖化条件と本件明細書に記載されたサンプル番号４～８の試験条件は酷似しており、甲第３号証の実施例１で得られた発酵前液と、本件実施例のサンプル番号４で得られた麦汁は、第１段階での保持時間が２０分異なり、第２段階での保持時間が２分異なり、温度が３℃異なる他は同様の条件で得られている。
すなわち、本件明細書に記載された糖化条件は、従来公知の条件と実質的に同一であるといわざるを得ないが、それでも本件特許発明が新規性を有する（甲３の実施例１で得られた発酵前液の１０～２０ｋＤａペプチド比率が４．８％以下になるということ）のであれば、本件の実施例のサンプル番号４～８の試験では本件明細書に記載されていない何らかの「タンパク分解を抑制する処理」が行われているために、差異が生じていると考えざるを得ない。
そのような「何らかの「タンパク分解を抑制する処理」」の詳細は本件明細書に記載されていないことから、当業者は本件特許発明を実施することはできない。
４ 証拠方法
・甲第１号証：東京高裁平成１３年（行ケ）第２０９号 審決取消請求事件の判決文
・甲第２号証：特表平９－５０５９９７号公報
・甲第３号証：国際公開第２０１１／０５２４８３号
・甲第４号証：醸造物の成分，ｐ１９１，財団法人日本醸造協会，１９９９
・甲第５号証：特開２０１４－１５８５０２号公報
なお、証拠の表記については、おおむね特許異議申立人の特許異議申立書における記載にしたがった。以下、「甲１」のようにいう。
第４ 当審の判断
以下に述べるとおり、当審は、特許異議申立人が申し立てる申立理由はいずれもその理由がないものと判断する。
１ 申立理由１（甲３に基づく新規性）について
（１） 甲３の記載事項等
ア 甲３の記載事項
甲３には以下の記載がある。下線については当審において付与した。以下同じ。
「請求の範囲
［請求項１］ 疎水性ポリペプチドを１．１ｇ／Ｌ以上含有する
ことを特徴とする発泡性飲料。
・・・
［請求項４］ 前記疎水性ポリペプチドは、分子量が１０～２５ｋＤａのポリペプチドを含む
ことを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載された発泡性飲料。
［請求項５］ 前記疎水性ポリペプチドは、大麦から得られたポリペプチドであることを特徴とする請求項１乃至４のいずれかに記載された発泡性飲料。」
「［００３１］ 疎水性ポリペプチドは、例えば、分子量が１０～２５ｋＤａのポリペプチドを含むことができる。すなわち、この場合、本飲料は、分子量が１０～２５ｋＤａの疎水性ポリペプチドを含むこととなる。
［００３２］ 疎水性ポリペプチドの分子量は、例えば、ゲルろ過クロマトグラフィーにより測定される。すなわち、分子量が１０～２５ｋＤａの疎水性ポリペプチドは、例えば、分子篩として機能する多孔性の固定相を備えたカラムを使用したゲルろ過クロマトグラフィーにおいて、分子量１０～２５ｋＤａに相当する保持時間で検出されるポリペプチドである。
［００３３］ また、疎水性ポリペプチドは、例えば、分子量が１０～１５ｋＤａのポリペプチドを含むことができる。より具体的に、疎水性ポリペプチドは、例えば、分子量が約１０ｋＤａのポリペプチドを含むことができる。」
「実施例１
［０１３２］［発泡性アルコール飲料の製造］
大麦及び大麦麦芽からなる大麦原料、ホップ及びプロテアーゼを含む原料を使用して、インフュージョン法により発泡性アルコール飲料を製造した。
［０１３３］ プロテアーゼとしては、７種類のプロテアーゼ（以下、「プロテアーゼＰ１～Ｐ７」という。）のうちいずれか１種を使用した。すなわち、プロテアーゼＰ１（オリエンターゼ１０ＮＬ、エイチビィアイ株式会社製）、プロテアーゼＰ２（プロチンＳＤ－ＰＣ１０Ｆ、天野エンザイム株式会社製）、プロテアーゼＰ３（ウマミザイムＧ、天野エンザイム株式会社製）、プロテアーゼＰ４（Ｔｒｙｐｓｉｎ４．０Ｔ、株式会社樋口商会製）、プロテアーゼＰ５（スミチームＬＰ５０Ｄ、新日本化学工業株式会社製）、プロテアーゼＰ６（スミチームＳＰ、新日本化学工業株式会社製）又はプロテアーゼＰ７（スミチームＡＣＰ－Ｇ、新日本化学工業株式会社製）を使用した。
［０１３４］ なお、これら７種類のプロテアーゼは、１６種類のプロテアーゼを使用した予備試験において、発泡性アルコール飲料の泡特性の向上に寄与し得る好ましいプロテアーゼとして選択されたものであった。
［０１３５］ すなわち、この予備試験におけるスクリーニングの結果、１６種類のプロテアーゼのうち、次の９種類；オリエンターゼ２２ＢＦ（エイチビィアイ株式会社製）、オリエンターゼ１０ＮＬ（エイチビィアイ株式会社製）、スミチーム焼酎（新日本化学工業株式会社製）、スミチームＰ（新日本化学工業株式会社製）、スミチームＲＰＩＩ（新日本化学工業株式会社製）、ビオプラーゼＯＰ（ナガセケムテックス株式会社製）、アロアーゼＸＡ－１０（ヤクルト薬品工業株式会社製）、パンチダーゼＰ（ヤクルト薬品工業株式会社製）、Ｎｅｕｔｒａｓｅ０．８Ｌ（ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ社製）；は、発泡性アルコール飲料の泡持ち特性の向上に寄与しないとの理由により採用されなかった。
［０１３６］ まず、５０℃の湯に、ホップを除く、大麦８３０ｇ（大麦原料の７７重量％）、大麦麦芽２５０ｇ（大麦原料の２３重量％）及びプロテアーゼ１．０８ｇ（大麦原料に対して０．１重量％）を含む原料を投入し、原料液を調製した。そして、この原料液を５０℃で３０分間保持することにより、大麦をプロテアーゼで処理するとともに、タンパク休止を行った。
［０１３７］ その後、原料液を６５℃で６０分間保持することにより、糖化を行った。次いで、原料液を７５℃で３分間保持した後、当該原料液をろ過し、発酵前液を得た。さらに、この発酵前液を１００℃まで加熱し、ホップ７ｇを添加して煮沸した。煮沸後の発酵前液をろ過した後、冷却した。
［０１３８］ 冷却された発酵前液に下面発酵酵母を添加して発酵液を調製した。この発酵液を１０～１３℃の温度で所定期間維持することにより前発酵を行った。さらに、前発酵後の発酵液を、より低温で所定期間維持することにより貯酒を行った。貯酒後の発酵液をろ過して、発泡性アルコール飲料を得た。
［０１３９］ また、比較の対照として、プロテアーゼを使用しない以外は同様にして、発泡性アルコール飲料を製造した。こうして、８種類の発泡性アルコール飲料を製造した。」
イ 甲３に記載された発明
甲３の実施例１の比較の対象として、プロテアーゼを使用しない以外は実施例１と同様にして製造された発酵アルコール飲料として、甲３には、以下の発明が記載されていると認める。
＜甲３発明＞
「大麦及び大麦麦芽からなる大麦原料、ホップを含む原料を使用して、インフュージョン法により製造した発泡性アルコール飲料であって、
まず、５０℃の湯に、ホップを除く、大麦８３０ｇ（大麦原料の７７重量％）、大麦麦芽２５０ｇ（大麦原料の２３重量％）を含む原料を投入し、原料液を調製し、その後、原料液を６５℃で６０分間保持することにより、糖化を行い、次いで、原料液を７５℃で３分間保持した後、当該原料液をろ過し、発酵前液を得、さらに、この発酵前液を１００℃まで加熱し、ホップ７ｇを添加して煮沸し、煮沸後の発酵前液をろ過した後、冷却し、冷却された発酵前液に下面発酵酵母を添加して発酵液を調製し、この発酵液を１０～１３℃の温度で所定期間維持することにより前発酵を行い、さらに、前発酵後の発酵液を、より低温で所定期間維持することにより貯酒を行い、貯酒後の発酵液をろ過して得られた、発泡性アルコール飲料。」
（２） 本件特許発明１について
本件特許発明１と甲３発明とを対比する。
甲３発明の「大麦及び大麦麦芽からなる大麦原料、ホップを含む原料を使用して、インフュージョン法により発泡性アルコール飲料を製造した発泡性アルコール飲料」は、発酵酵母を添加して発酵させているから、本件特許発明１の「麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料」に相当する。
してみると、両者は、
「麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料。」
である点で一致し、次の点で相違する。
＜相違点３－１＞
「ビールテイスト発酵アルコール飲料」に関し、本件特許発明１は「大麦麦芽を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）のペプチド画分を含んでなり、飲料中の全タンパク量に対する前記ペプチド画分に含まれるペプチド量の比率が４．８％より大きく８．０％以下であり、かつ、飲料中の重合度５～１０のα－グルカンの濃度が７．１ｍｇ／ｍＬ以上１６．０ｍｇ／ｍＬ以下である」と特定するのに対し、甲３発明にはそのような特定がない点
そして、相違点３－１は実質的な相違点であるから、本件特許発明１は、甲３発明ではない。
なお、特許異議申立人は、本件特許明細書のサンプルと甲３発明とで糖化条件が酷似しているから、得られる物が同じである蓋然性が高いと主張するが、甲３発明は、大麦麦芽と大麦が原料で、糖化時に酵素製剤が添加されておらず、本件特許明細書のサンプルでは、大麦麦芽のみが原料で酵素製剤が添加されている点で少なくとも異なっており、大麦麦芽や大麦には糖化酵素やプロテアーゼ（ペプチド分解酵素）が含まれるため、原料が「大麦麦芽と大麦」と「大麦麦芽」のみとでは、系中に含まれる酵素が異なり、得られるペプチドも異なると考えられるから、上記特許異議申立人の主張は採用できない。
また、特許異議申立人は、特許異議申立書において、甲３における実施例１に記載されている発明を引用発明としているようにも見受けられるが、そのように甲３発明を認定すると、本件特許明細書のサンプルの製造方法と、糖化前にプロテアーゼ処理を行う点もさらに相違することになり、さらなる相違点も、よりタンパク含量に影響するから、当該引用発明を認定したとしても、特許異議申立人の主張は採用できない。
（３） 本件特許発明２について
本件特許発明２は、請求項１の記載を引用して特定するものである。
そして、上記（２）で検討のとおり、本件特許発明１は、甲３発明ではないから、本件特許発明１の全ての特定事項を含む本件特許発明２も同様に、甲３発明ではない。
２ 申立理由２（甲４に基づく進歩性）について
（１） 甲４の記載事項等
ア 甲４の記載事項
甲４には以下の記載がある。
「第１表
〔図省略〕
」（ｐ１９１ 左欄）
イ 甲４に記載された発明
上記アの記載から、甲４には、以下の発明が記載されていると認める。
＜甲４発明＞
「ＤＰ６－１０のα－グルカンを４２００－１２０００ｍｇ／ｌ含むビール。」
（２） 本件特許発明１について
本件特許発明１と甲４発明とを対比する。
甲４発明の「ビール」は、当業者の技術常識を参酌すれば、本件特許発明１の「麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料」に相当する。
してみると、両者は、
「麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料。」
である点で一致し、次の点で相違する。
＜相違点４－１＞
「ビールテイスト発酵アルコール飲料」に関し、本件特許発明１は「大麦麦芽を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）のペプチド画分を含んでなり、飲料中の全タンパク量に対する前記ペプチド画分に含まれるペプチド量の比率が４．８％より大きく８．０％以下であり、」と特定するとともに、そのグルカン濃度に関し、「飲料中の重合度５～１０のα－グルカンの濃度が７．１ｍｇ／ｍＬ以上１６．０ｍｇ／ｍＬ以下である」と特定するのに対し、甲４発明には、そのようなペプチド画分についての特定がなく、重合度６～１０のα－グルカンの濃度が４２００～１２０００ｍｇ／ｌである点
以下、相違点４－１について検討する。
甲４発明において、相違点４－１に係る「分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）のペプチド画分に含まれるペプチド量」という発明特定事項に着目し、「飲料中の全タンパク質量に対する前記ペプチド画分に含まれるペプチドの量の比率」として調整し、その「比率が４．８％より大きく８．０％以下」とすること、当該ペプチド画分として、「麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料由来する」ものとすること、さらには、「飲料中の重合度５～１０のα－グルカンの濃度が７．１ｍｇ／ｍＬ以上１６．０ｍｇ／ｍＬ以下である」ものとすることは、甲４及び他の全ての証拠の記載をみても導くことができない。
そして、本件特許発明１は、当該特定事項を満たすことにより、低糖質ビールテイスト発酵アルコール飲料において、「ビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーがあり、味の持続性が認められる」との格別の効果を奏するものである。
したがって、本件特許発明１は、甲４発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものではない。
（３） 本件特許発明２について
本件特許発明２は、請求項１の記載を引用して特定するものである。
そして、上記（２）で検討のとおり、本件特許発明１は、甲４発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものでもないから、本件特許発明１の全ての特定事項を含む本件特許発明２も同様に、甲４発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものでもない。
３ 申立理由３（実施可能要件）について
（１） 実施可能要件の判断基準
本件特許発明１、２及び８は、上記第２のとおり、「物」の発明であるところ、物の発明における実施とは、その物の生産、使用等をする行為をいうから（特許法第２条第３項第１号）、例えば、本件特許の明細書の詳細な説明及び図面（以下、「明細書等」という。）にその物を生産することができる具体的な記載があるか、そのような記載がなくても、出願時の技術常識に基づいて当業者がその物を生産することができるのであれば、実施可能要件を満たすということができる。
また、本件特許発明３ないし７は、上記第２のとおり、「物を生産する方法」の発明であるところ、物を生産する方法の発明における実施とは、そのものを生産する方法の使用をする行為のほか、その方法により生産した物の使用等をする行為をいうから（特許法第２条第３項第３号）、例えば、明細書等にその物を生産する方法を使用することができることの具体的な記載があるか、そのような記載がなくても、出願時の技術常識に基づいて当業者がその物を生産する方法を使用することができるのであれば、実施可能要件を満たすということができる。
さらに、本件特許発明９は、上記第２のとおり、「方法」の発明であるところ、方法の発明における実施とは、その方法の使用をする行為をいうから（特許法第２条第３項第２号）、方法の発明について、例えば、明細書等にその方法を使用することができることの具体的な記載があるか、そのような記載がなくても、出願時の技術常識に基づいて当業者がその方法を使用することができるのであれば、実施可能要件を満たすということができる。
（２） 明細書等の記載
本件特許の明細書等には以下の記載がある。
「【技術分野】
【０００１】
本発明は麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料とその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビールテイスト発酵アルコール飲料にコクや味の厚みを付与する技術としては、カルボキシメチルリジンを含むペプチドをコク付与物質として用いる技術（特許文献１）が知られている。しかし、ビールテイスト発酵アルコール飲料の香味の実現には依然として改善の余地があった。また、柔らかくスムーズなテクスチャーの付与や、味の持続性の実現、余韻の付与などの観点から、ビールの香味の改良を試みた例は発明者らが知る限り報告されていない。」
「【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ビールは、発泡酒や新ジャンルと比べて柔らかくスムーズなテクスチャーを有し、ボディ感が強いなどの好ましい味の特徴がある。本発明者らは、この違いに基づき、ビールの特徴をさらに強化する技術開発が実現すれば、これまでにない香味特徴のあるビールの製造を実現できると考えた。
【０００５】
本発明は、ビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーがあり、味の持続性が認められる、新しい香味を有するビールテイスト発酵アルコール飲料とその製造方法を提供することを目的とする。本発明はまた、ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善剤と風味改善方法を提供することも目的とする。」
「【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、ビールテイスト発酵アルコール飲料において、特定分子量のペプチドと特定重合度のα－グルカンがビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーの付与や味の持続性に寄与することを見出した。本発明者らはまた、特定分子量のペプチドの比率や特定重合度のα－グルカンの含有量を特定範囲内にすることで、よりビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーや味の持続性が実現できることを見出した。本発明者らはさらに、ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善に寄与するペプチドを具体的に特定した。本発明はこれらの知見に基づくものである。」
「【００１３】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料では、全タンパク量に対する分子量１０～２０ｋＤａのペプチド量の比率（ペプチド比率）（好ましくは、ビールテイスト発酵アルコール飲料の原料に由来する分子量１０～２０ｋＤａのペプチド比率）が特定値以上であることを特徴とする。ここで、ペプチド比率の算出に当たっては、飲料中のタンパク濃度（ｍｇ／ｍＬ）を全タンパク量とし、飲料中の分子量１０～２０ｋＤａのペプチド濃度（ｍｇ／ｍＬ）を分子量１０～２０ｋＤａのペプチド量とすることができる。また、本明細書において「ペプチド比率」の算出の元になるペプチド量は１０～２０ｋＤａの分子量を有する１種または２種以上のペプチドの含有量を合計して算出されるものである。また本明細書においてペプチドの「分子量」はＨＰＬＣゲル濾過法により測定されるものであり、測定の具体例は後記実施例１に示される通りである。ペプチドおよびタンパクの定量はローリー法（Lowry法）により実施することができる。
【００１４】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料は、新しい香味を有すること、すなわち、味のスムーズさと味の持続性が増強されたことを特徴とする。ここで、「味のスムーズさ」とは、舌で味を感じる時の口当たりの柔らかさの度合いを意味する。また、「味の持続性」とは、溜飲後に持続する味の余韻の度合いを意味する。
【００１５】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料では、全タンパク量に対する分子量１０～２０ｋＤａのペプチド量の比率を４．８％より大きい比率にすることができ、好ましくは４．９％以上、より好ましくは５．１％以上、さらに好ましくは５．２％以上、特に好ましくは５．４％以上、最も好ましくは５．７％以上である。該比率は味の調和の観点から上限を設けることができ、例えば、８．０％を上限とすることができる。
【００１６】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料ではまた、重合度５～１０のα－グルカンの濃度が特定値以上であることを特徴とする。本明細書において「α－グルカン濃度」は重合度５～１０の１種または２種以上のα－グルカンの含有量を合計して算出されるものである。また本明細書において「α－グルカン」とは複数のグルコース分子がα－１，４－グルコシド結合により結合して構成された直鎖状または分岐状のグルカン（例えば、α－１，４－グルコシド結合およびα－１，６グルコシド結合で構成された分岐状のグルカン）を意味する。さらに、本明細書においてα－グルカンの「重合度」はグルカンを構成するグルコース残基の個数を意味し、直鎖状グルカンを構成するグルコース残基の個数のみならず、分岐構造を構成するグルコース残基の個数を含む。α－グルカンの重合度と含有量の測定は、例えば、コロナＣＡＤ検出器を用いたＨＰＬＣ分析により実施することができ、測定の具体例は後記実施例１に示される通りである。なお、本明細書および図面において重合度は単に「Ｇ」と表記されることがある。
【００１７】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料では重合度５～１０のα－グルカン濃度を７．１ｍｇ／ｍＬ以上の濃度にすることができ、好ましくは７．１ｍｇ／ｍＬより大きい濃度であり、より好ましくは１１．１ｍｇ／ｍＬ以上である。該α－グルカン濃度は味の調和の観点から上限を設けることができ、例えば、１６．０ｍｇ／ｍＬを上限とすることができる。
【００１８】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料において味のスムーズさと味の持続性をより増強する観点から、分子量１０～２０ｋＤａのペプチド比率に加えて重合度５～１０のα－グルカン濃度を所定値とすることが好ましい。本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料（特に、麦芽使用比率が５０％以上のもの）において分子量１０～２０ｋＤａのペプチドを所定の比率にするとともに重合度５～１０のα－グルカン濃度を所定の濃度に調整することにより味のスムーズさと味の持続性がより一層増強される。すなわち、本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料（特に、麦芽使用比率が５０％以上のもの）では、全タンパク量に対する分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）のペプチド量の比率を４．８％より大きい比率（好ましくは４．９％以上、より好ましくは５．１％以上、さらに好ましくは５．２％以上、特に好ましくは５．４％以上、最も好ましくは５．７％以上）にするとともに、重合度５～１０のα－グルカンの濃度を７．１ｍｇ／ｍＬ以上の濃度（好ましくは７．１ｍｇ／ｍＬより大きい濃度、より好ましくは１１．１ｍｇ／ｍＬ以上の濃度）にすることができる。ペプチド比率およびα－グルカン濃度はいずれも前記のような上限を設けることができる。
【００１９】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料は分子量１０～２０ｋＤａのペプチド比率および／または重合度５～１０のα－グルカン濃度が所定値の範囲内に調整される限り、通常のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造手順に従って製造することができる。例えば、麦芽、ホップ、副原料、醸造用水等の醸造原料から調製された麦汁に発酵用ビール酵母を添加して発酵を行い、発酵液を醸成させて、発酵麦芽飲料を製造することができる。得られたビールテイストの発酵アルコール飲料は、低温にて貯蔵した後、濾過工程により酵母を除去することができる。なお、ビールテイスト発酵アルコール飲料のうちオールモルトビールは、麦芽、ホップ、水から製造できることはいうまでもない。」
「【００２２】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料の製法において製造飲料中の分子量１０～２０ｋＤａのペプチド比率を所定値の範囲内に調整するためには、例えば、原料である麦芽および／または未発芽の麦類の仕込み・糖化工程におけるタンパク分解を抑制することや、原料である麦芽の製麦工程におけるタンパク分解度を抑制することなどにより、調整することができる。なお、タンパク分解としては、麦芽や未発芽の麦類に内在するプロテアーゼ、あるいは外から添加するプロテアーゼ製剤によるものが挙げられる。分解の抑制は、プロテアーゼ製剤の添加量を減じる、タンパク分解の作用温度における処理時間を減じる、作用ｐＨを至適条件から変更するなどにより行うことができる。
【００２３】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料の製法において製造飲料中の重合度５～１０のα－グルカン濃度を所定値の範囲内に調整するためには、例えば、原料である麦芽および／または未発芽の麦類の仕込みや糖化工程におけるα－グルカン分解を抑制すること、原料である麦芽の製麦工程におけるα－グルカン分解を抑制すること、あるいはα－グルカンの分解度が抑制された液糖を用いることなどにより、調整することができる。なお、α－グルカン分解としては、麦芽や未発芽の麦類に内在するαアミラーゼやβアミラーゼ等、あるいは外から添加するαアミラーゼ製剤、グルコアミラーゼ製剤、プルラナーゼ製剤等によるものが挙げられる。分解の抑制は、αアミラーゼ製剤、グルコアミラーゼ製剤、プルラナーゼ製剤等の添加量を減じる、α－グルカン分解の作用温度における処理時間を減じる、作用ｐＨを至適条件から変更するなどにより行うことができる。
【００２４】
本発明においてはまた、分子量１０～２０ｋＤａのペプチドを含む原料や、重合度５～１０のα－グルカンを含む原料から、該ペプチドを含む画分や、該α－グルカンを含む画分を調製し、該画分をビールテイスト発酵アルコール飲料に添加することによって、分子量１０～２０ｋＤａのペプチド比率や、重合度５～１０のα－グルカン濃度がそれぞれ所定値の範囲内に調整されたビールテイスト発酵アルコール飲料を製造することができる。典型的には、ビールテイスト発酵アルコール飲料を製造し、該飲料から実施例１に記載された手順に従って分子量１０～２０ｋＤａのペプチドが含まれる画分や重合度５～１０のα－グルカンが含まれる画分を調製し、該画分をビールテイスト発酵アルコール飲料に添加することによって、分子量１０～２０ｋＤａのペプチド比率や、重合度５～１０のα－グルカン濃度がそれぞれ所定値の範囲内に調整されたビールテイスト発酵アルコール飲料を製造することができる。」
「【００２７】
分子量１０～２０ｋＤａの１種または２種以上のペプチド（特に、麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来する分子量１０～２０ｋＤａの１種または２種以上のペプチド）の例としては、α－アミラーゼ／トリプシンインヒビター、トリプシンインヒビター、α－アミラーゼ・インヒビター（ＢＤＡＩ－１）、非特異的脂質転移タンパク１（non-specific lipid-transfer protein 1）およびアベニン・ライクａ１が挙げられ、好ましくは、これらのタンパク質およびペプチドは大麦由来、一部は小麦由来のものである。α－アミラーゼ／トリプシンインヒビター、トリプシンインヒビター、α－アミラーゼ・インヒビター（ＢＤＡＩ－１）、非特異的脂質転移タンパク１あるいはアベニン・ライクａ１をビールテイスト発酵アルコール飲料に配合するときは、これらのペプチドあるいはタンパク質は麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料から調製したもの以外のペプチドあるいはタンパク質であってもよい。」
「【００３０】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料において味のスムーズさと味の持続性をより増強する観点から、分子量１０～２０ｋＤａのペプチドに加えて重合度５～１０のα－グルカンを配合することが好ましい。本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料（特に、麦芽使用比率が５０％以上のもの）において分子量１０～２０ｋＤａのペプチドを所定の比率にするとともに重合度５～１０のα－グルカン濃度を所定の濃度に調整することにより味のスムーズさと味の持続性がより一層増強される。すなわち、本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料（特に、麦芽使用比率が５０％以上のもの）では、全タンパク量に対する分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）のペプチド量の比率が４．８％より大きく（好ましくは４．９％以上、より好ましくは５．１％以上、さらに好ましくは５．２％以上、特に好ましくは５．４％以上、最も好ましくは５．７％以上）なるように該ペプチドを配合するとともに、重合度５～１０のα－グルカンの濃度が７．１ｍｇ／ｍＬ以上（好ましくは７．１ｍｇ／ｍＬより大きく、より好ましくは１１．１ｍｇ／ｍＬ以上）なるように該グルカンを配合することができる。ペプチド比率およびα－グルカン濃度はいずれも前記のような上限を設けることができる。
【００３１】
ビールテイスト発酵アルコール飲料に配合される分子量１０～２０ｋＤａの１種または２種以上のペプチドおよび重合度５～１０のα－グルカンは、該ペプチドを含む原料や、該α－グルカンを含む原料から調製することができる。分子量１０～２０ｋＤａの１種または２種以上のペプチドを含む原料としては、麦芽および／または未発芽の麦類並びにその加工品、穀物タンパク分解物（例えば、大豆タンパク分解物、コーンタンパク分解物）が挙げられる。麦芽および／または未発芽の麦類の加工品としては、麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とする麦汁、未発芽麦類のエキス、麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料が挙げられ、好ましくは、麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料、より好ましくは麦芽を麦由来の原料の一部または全部とするビールテイスト発酵アルコール飲料である。原料からの分子量１０～２０ｋＤａの１種または２種以上のペプチドの調製手段としては、限外濾過法および硫安沈殿法の組み合わせや、ゲル濾過分画および固相抽出カラムの組み合わせが挙げられ、工業的生産の観点からは限外濾過法および硫安沈殿法の組み合わせが好ましい。なお、限外濾過法および硫安沈殿法の組み合わせにより分子量１０～２０ｋＤａの１種または２種以上のペプチドを調製するときには、限外濾過法を実施し、次いで、硫安沈殿法を実施することができる。重合度５～１０のα－グルカンを含む原料としては、麦芽および／または未発芽の麦類並びにその加工品や、米、とうもろこし、馬鈴薯、糖類が挙げられる。麦芽および／または未発芽の麦類の加工品としては、上記のものが挙げられる。原料からの重合度５～１０のα－グルカンの調製手段としては、ゲル濾過分画および固相抽出カラムの組み合わせや、限外濾過、クロマト分離などの分離手段が挙げられ、これらの調製手段をイオン交換樹脂や活性炭を用いた不純物除去手段と組み合わせて実施してもよい。
【００３２】
ビールテイスト発酵アルコール飲料に配合される分子量１０～２０ｋＤａの１種または２種以上のペプチドおよび重合度５～１０のα－グルカンは、好ましくは麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料（より好ましくは麦由来の原料として少なくとも麦芽を使用するビールテイスト発酵アルコール飲料、特に好ましくはオールモルトビール）から調製することができる。例えば、ビールテイスト発酵アルコール飲料を製造し、ゲル濾過分画や固相抽出カラムを用いて該飲料から分子量１０～２０ｋＤａのペプチドが含まれる画分や重合度５～１０のα－グルカンが含まれる画分を調製することができる。分子量１０～２０ｋＤａのペプチドや重合度５～１０のα－グルカンは必ずしも単離・精製されている必要はなく、ビールテイスト発酵アルコール飲料から分画処理されて得られたペプチド画分やα－グルカン画分をビールテイスト発酵アルコール飲料へ配合することができる。
【００３３】
ビールテイスト発酵アルコール飲料への分子量１０～２０ｋＤａのペプチドや重合度５～１０のα－グルカンの配合は、発酵前の発酵前液、発酵中の発酵液、あるいは発酵後の発酵液への添加により行うことができる。例えば、ビールテイスト発酵アルコール飲料を製造し、該飲料から分子量１０～２０ｋＤａのペプチドが含まれる画分や重合度５～１０のα－グルカンが含まれる画分を調製し、該画分を発酵後のビールテイスト発酵アルコール飲料に添加することによって、分子量１０～２０ｋＤａのペプチドや重合度５～１０のα－グルカンが配合されたビールテイスト発酵アルコール飲料を製造することができる。
【００３４】
本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料は分子量１０～２０ｋＤａのペプチドが所定の比率となるよう配合され、場合によってはさらに重合度５～１０のα－グルカン濃度が所定値となるよう配合されること以外は、通常のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造手順に従って製造することができる。例えば、麦芽、ホップ、副原料、醸造用水等の醸造原料から調製された麦汁に発酵用ビール酵母を添加して発酵を行い、発酵麦芽飲料を醸成させることができる。得られたビールテイストの発酵アルコール飲料は、低温にて貯蔵した後、ろ過工程により酵母を除去することができる。」
「【００３７】
本発明の別の面によれば、分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）の１種または２種以上のペプチドおよび／または重合度５～１０のα－グルカンを有効成分として含んでなる、ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善剤が提供される。本発明のさらに別の面によれば、分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）の１種または２種以上のペプチドおよび／または重合度５～１０のα－グルカンを添加する工程を含んでなる、ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善方法が提供される。本明細書において「ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善」とは、味のスムーズさと味の持続性が増強されることを意味するものとする。また、分子量１０～２０ｋＤａ（ＨＰＬＣゲル濾過法）の１種または２種以上のペプチドおよび重合度５～１０のα－グルカンは、好ましくは麦芽および／または未発芽の麦類を原料の少なくとも一部とするビールテイスト発酵アルコール飲料に由来するものである。本発明の風味改善剤と風味改善方法は本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料および該飲料の製造方法についての記載に従って実施することができる。」
「【実施例】
【００３８】
以下の例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。なお、以下の例において割合（％）は特に断りがない限り質量％を表す。
【００３９】
参考例１：ビールテイスト飲料に好ましい香味を付与するペプチド画分とα－グルカン画分の特定
（１）ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造
大麦麦芽、ホップ、酵素製剤を用いて、インフュージョン法にてビールテイスト発酵アルコール飲料を製造した。
【００４０】
試験区１は、５０℃の湯３００ｍＬに大麦麦芽１００ｇを入れ、酵素製剤を添加して６０分保持後、６５℃に昇温して６０分保持し、さらに７８℃に昇温して５分保持後、濾過して麦汁を得た。試験区２は、５０℃工程を行わず、酵素製剤を添加しない以外は同様に麦汁を得た。続いて、ホップを０．８ｇ／Ｌ投入して１００℃で９０分煮沸したのち、濾過して発酵前液を得た。
【００４１】
その後、常法に従ってビール酵母により発酵を行い、発酵液の香味確認を行った。８名のパネルにより、「味の柔らかさ」、すなわち雑味が抑制され、ビールらしく柔らかくスムーズなテクスチャーがあり、調和のとれた味わいがあることを指標に、最低は１点、最高は５点として五段階で官能評価を行い、平均点を算出した。結果は表１に示される通りであった。
【００４２】
【表１】
〔図省略〕
【００４３】
表１の通り、試験区１よりも試験区２の方が官能評価のスコア（味の柔らかさ）が良好であり、香味の印象も好ましかった
【００４４】
（２）ゲル濾過分画
上記（１）で得られた発酵液を０．４５μｍフィルターで濾過し、濾過済み発酵液を計量して凍結乾燥した。乾燥物を１００ｍＭ ＮａＣｌ溶液で溶解して５倍濃縮液を調製し、分画用サンプルとした。サンプルは、以下の条件にてゲル濾過分画を行った。
【００４５】
カラム：Ｈｉｌｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ３０ｐｇ２６／６００（ＧＥヘルスケア社製）
サンプル注入量：５ｍＬ
溶離液組成：１００ｍＭ ＮａＣｌ
流速：２．５ｍＬ／分（流速一定）
検出波長：２１５ｎｍ
分取：０．２９ｃｖ（カラム・ボリューム）から１９．１ｍＬ（フラクション０）、その後０．３５ｃｖから５ｍＬずつ分画（フラクション１～５１）
【００４６】
分画物の官能評価により、香味の特徴の違いによって、表２のようにフラクションをプレ画分、Ａ１、Ａ２、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇの９つのグループに分けた。
【００４７】
【表２】
〔図省略〕
【００４８】
（３）ペプチド画分とα－グルカン画分の精製
上記（２）で得られた各画分は、固相抽出カラム（画分Ａ１、Ａ２、Ｂは、Ｂｏｎｄ Ｅｌｕｔｅ Ｃ１８ ＥＷＰ、画分Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧはＢｏｎｄ Ｅｌｕｔｅ Ｃ１８を使用、Agilent technologies社製）にて吸着処理を行い、脱塩水で洗浄した後、５０％エタノール水溶液にて溶出して、濃縮乾固を行い、これを脱塩水にて復水し、濃縮液とした。これをペプチド画分とした。また、固相抽出カラムの素通り画分は、さらにアニオン・カチオン・イオン交換樹脂（アンバーライトＩＲ１２０ＨおよびアンバーライトＸＥ５８３、オルガノ社製）にて脱塩後、少量の活性炭にて脱臭処理し、濃縮乾固を行い、これを脱塩水にて復水し、濃縮液とした。これをα－グルカン画分とした。
【００４９】
（４）ローリー法によるタンパク定量
上記（３）のゲル濾過分画によって得られたペプチド画分のタンパク定量は市販のキット（ＤＣプロテインアッセイ、Ｂｉｏ－Ｒａｄ社製）を用いたＬｏｗｒｙ法で行った。まず、上記分画液を５０μＬ採って遠心減圧濃縮乾固し、超純水１０μＬを加えて再溶解して分析サンプルとした。そこにＡ液を５０μＬ加えて撹拌し、続いてＢ液を４００μＬ加えて攪拌した。室温で１５分発色反応を行った後、９６ウェルプレートに３５０μＬ移して７５０ｎｍの吸光度を測定した。得られた吸光度と予め作成した検量線に基づき、ペプチド量を算出した。なお、検量線はＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を用いて作成した。
【００５０】
（５）α－グルカンの定量
上記（３）で得られたα－グルカン画分中に含まれるα－グルカンの定量は、グルコアミラーゼと緩衝液（最終濃度１０Ｕ／ｍＬ、１００ｍＭ酢酸Ｎａ ｐＨ４．５）を添加して４０℃一晩反応させた後、市販のグルコースＣ－IIテストワコー（和光純薬製）にてグルコースとして測定した。また、含まれるα－グルカンの鎖長分布状況は、グルコアミラーゼ処理を行わず、ＭＣＩ－ｇｅｌ ＣＫ０２ＡＳカラム（２０×２５０ｍｍ）およびコロナＣＡＤ検出器（コロナ荷電化粒子検出器）により、評価した。具体的には、以下の条件のようにして重合度（鎖長）を分析した。移動度の標準品として、Ｇ１～Ｇ７マルトオリゴ糖およびアミロースＤＰ１７を用いた。
【００５１】
カラム：ＭＣＩ－ｇｅｌ ＣＫ０２ＡＳカラム（２０×２５０ｍｍ、三菱化学社製）
移動相：ＭＱ水
流速：１．０ｍＬ／分
カラム温度：８５℃
検出器：コロナＣＡＤ検出器
【００５２】
（６）官能評価
これらの分画・精製サンプルを、大麦と大麦麦芽を使用した市販の麦芽使用比率４９％未満のビール系アルコール飲料に、その飲料に含まれる各画分量の５０％上乗せとなるよう添加し（図１および図２参照）、５名のパネルにより官能評価を行った。
【００５３】
官能評価の指標は、「旨み、甘味、厚み、ボディ、およびオフフレーバーとしての渋み・味の不調和」の総合評価として、１～５点の五段階スコアで評価した。無添加のコントロールをスコア２．５とした。官能評価スコアの平均値は図３に、官能評価コメントは表３に示される通りであった。
【００５４】
【表３】
〔図省略〕
【００５５】
ペプチド分画物は、プレ画分からＤにかけて、試験区２の官能評価スコア（図３）が高く、分画前の発酵液の官能評価結果と一致した。また、試験区２の画分Ａ１およびＡ２において、スコアが高く、柔らかさ、雑味低下との官能評価コメントだった（表３）。試験区２のプレ画分では、スコアは同等に高いが、柔らかいが味自体は少ないとの官能評価コメントだった。画分Ｂ～Ｄは、スコアは同等に高いが、官能評価コメントでは厚み、ボディ、旨味の寄与がより強いと評価された。すなわち、プレ画分、Ａ１、Ａ２、Ｂ、Ｃ、Ｄで、試験区２の評価は高いが、それぞれ味質が異なっており、画分Ａ１、Ａ２は、ビールらしい柔らかさ、雑味低下等の効果があることがわかった。
【００５６】
α－グルカン画分では、画分ＢおよびＣを添加した場合、官能評価スコア（図３）が高くなり、官能評価コメント（表３）では、甘味、まろやか、スムーズさと表現されることがわかった。画分Ａ１、Ａ２由来のα－グルカンは、明確な香味が感じられなかった。
【００５７】
ペプチド分画物は、実施例１に記載の、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５１０／３００カラムにて分析を行い、分子量を推定したところ、画分Ａ１のペプチドが分子量約１０～２０ｋＤａに分布し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動上でも、画分Ａ１～Ａ２において、同様の分子量約１０～２０ｋＤａのペプチドが分布していることが確認された（データ示さず）。また、香味上優れていた試験区２では、そのペプチド量が多くなっていることが確認された（図１）。
【００５８】
また、α－グルカン分画物の重合度分布を確認したところ表４の通りであった。
【００５９】
【表４】
〔図省略〕
【００６０】
表４に示される通り、明確な香味が感じられた画分Ｂ、Ｃの主要な成分は、重合度（ＤＰ）が２～１０の範囲が含まれることが確認された。また、香味上優れていた試験区２では、その画分のα－グルカン量が多くなっていることが確認された。画分Ａ１、Ａ２由来のα－グルカンは、主要な成分の鎖長がそれよりも長く（８～約４０）、明確な香味が感じられなかった。
【００６１】
以上の結果より、分画・精製した分子量約１０～２０ｋＤａのペプチド画分Ａ１およびＡ２並びにグルコースの重合度が２～１０のα－グルカン画分ＢおよびＣは、雑味が抑制され調和のとれたビールらしい味わいをビール系飲料に付与できることが明らかとなった。
【００６２】
実施例１：ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造と官能評価
Ａ：ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造
ビールテイスト発酵アルコール飲料の製造においては、主原料として大麦麦芽を使用した。糖化に際しては酵素製剤を用い、糖化の温度、時間を調整し、濾過することで、異なる組成の麦汁を得た。すなわち、糖化の温度帯は６２℃、６４℃、６５℃あるいは６８℃など、６２～６８℃の中で選択した。糖化の時間は、それぞれの温度工程において、５分～４０分の間で調整した。また、原料の熱処理温度は７０℃～１００℃の間で選択した。具体的には以下のようにして麦汁を得た。
【００６３】
（ア）サンプル番号４の糖化条件
６５℃の湯１００質量部に対して、大麦麦芽４０質量部、酵素製剤を投入して４０分保持後、７８℃に昇温して５分保持した後、濾過して麦汁を得た。
【００６４】
（イ）サンプル番号５の糖化条件
６５℃の湯１００質量部に対して、大麦麦芽３３．４質量部、酵素製剤を投入して３０分保持後、７８℃に昇温して５分保持した後、濾過して麦汁を得た。
【００６５】
（ウ）サンプル番号６～８の糖化条件
６２℃の湯１００質量部に対して、大麦麦芽４０質量部、酵素製剤を投入して４０分保持後、７８℃に昇温して５分保持した後、濾過して麦汁を得た。６２℃保持中に、一部の醪を別の釜に移送し、熱処理した後に元の釜に返送した。
【００６６】
上記の麦汁調製工程（ア）～（ウ）に続いて、得られたそれぞれの麦汁にホップを投入して１００℃で９０分間煮沸した後、麦汁静置を行ない、トリューブを分離した後、冷却して発酵前液を得た。その後、発酵前液に下面発酵酵母を添加し、常法に従って主発酵および後発酵を行なった。続いて、後発酵後の発酵液をより低温で保持することにより貯蔵を行ない、濾過して、清澄なビールテイスト発酵アルコール飲料（サンプル番号４～８）を得た。
【００６７】
Ｂ：市販ビール
麦芽使用比率６７％以上の市販ビール（サンプル番号１～３）（市販品）を、それぞれ分析試験に供した。
【００６８】
Ｃ：ビールテイスト発酵アルコール飲料のα－グルカン量の定量
（ア）ＨＰＬＣ分析用のサンプル調製
サンプル番号１～３（市販品）およびサンプル番号４～８（試醸品）は、固相抽出カラムを用いて分離し、分画用サンプルを得た。具体的には、製品液を固相抽出カラム（Ｂｏｎｄ Ｅｌｕｔｅ Ｃ１８、Agilent technologies社製）にて吸着処理を行って素通り画分を回収し、回収液をさらにＢｏｎｄ Ｅｌｕｔｅ Ｃ１８ ＥＷＰ（Agilent technologies社製）に吸着させ、素通り画分を回収した。回収した素通り画分は、さらにイオン交換樹脂Ｓｅｐ Ｐａｋ ＱＭＡおよびＳｅｐ ＰａｋＣＭ（いずれもWaters社）で順に処理した。得られた液を遠心濃縮させ、乾燥物を復水して分画用サンプルとした。
【００６９】
（イ）ＨＰＬＣによる糖分析
ＭＣＩ－ｇｅｌ ＣＫ０２ＡＳカラム（２０×２５０ｍｍ）およびコロナＣＡＤ検出器により、サンプルに含まれるα－グルカンの鎖長分布状況を評価した。具体的には、以下の条件のようにして重合度（鎖長）を分析した。Ｇ５～Ｇ１０マルトオリゴ糖を標準品とした検量線で濃度を分析した。Ｇ５はマルトペンタオース（Maltopentaose）、Ｇ６はマルトヘキサオース（Maltohexaose）、Ｇ７はマルトヘプタオース（Maltoheptaose）、Ｇ８はマルトオクタオース（Maltooctaose）、Ｇ９はマルトノナオース（Maltononaose）、Ｇ１０はマルトデカオース（Maltodecaose）である。マルトペンタオース（Maltopentaose）、マルトヘキサオース（Maltohexaose）およびマルトヘプタオース（Maltoheptaose）については東京化成社より標準品を購入し、マルトオクタオース（Maltooctaose）、マルトノナオース（Maltononaose）およびマルトデカオース（Maltodecaose）についてはElicityl SA社より標準品を購入し、質量分析器条件を設定した。
【００７０】
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：ＭＣＩ－ｇｅｌ ＣＫ０２ＡＳカラム（２０×２５０ｍｍ、三菱化学社製）
移動相：ＭＱ水
流速：１．０ｍＬ／分
カラム温度：８５℃
検出器：コロナＣＡＤ検出器
【００７１】
上記（イ）で設定した分析条件のもとでサンプル番号１～８の分析を行った結果は表５に示される通りである。
【００７２】
【表５】
〔図省略〕
【００７３】
Ｄ：タンパク定量
（ア）ゲル濾過分画用のサンプル調製
サンプル番号１～３（市販品）およびサンプル番号４～８（試醸品）は、計量して凍結乾燥した。乾燥物を５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０１５０ｍＭ ＮａＣｌ含む）で溶解して２．５倍濃縮液を調製し、分画用サンプルとした。
【００７４】
（イ）ＨＰＬＣゲル濾過法
ＨＰＬＣゲル濾過法の条件は以下の通りであった。
＜ＨＰＬＣゲル濾過法分析条件＞
カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５１０／３００（ＧＥヘルスケア社製）
サンプル注入量：１００μＬ
溶離液組成：５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）、２０％（ｖ／ｖ）アセトニトリル、１５０ｍＭ ＮａＣｌ
流速：０．５ｍＬ／分（流速一定）
検出波長：２１５ｎｍ
分画プログラム：
【００７５】
【表６】
〔図省略〕
【００７６】
（ウ）分画範囲の設定
上記（イ）のＨＰＬＣゲル濾過法条件記載のカラム、溶離液、流速、検出波長において、分子量既知のペプチドを０．１～５ｍｇ／ｍＬで適宜超純水に溶解したものを５０μＬ注入してＨＰＬＣ分析を行い、保持時間を確認した（表７）。その保持時間、分子量から検量線（図４）を作成し、分子量範囲と分画範囲を決定した。
【００７７】
【表７】
〔図省略〕
【００７８】
（エ）分画液のＬｏｗｒｙ法によるタンパク定量
タンパク定量は、参考例１に記載のＬｏｗｒｙ法により行った。なお、得られた吸光度とＢＳＡ濃度から検量線を作成し、分画液のペプチド量（ＢＳＡ換算）を計算し、分画液量、濃縮倍率から、当該画分の製品相当ペプチド濃度（ｍｇ／ｍＬ）を算出した。
【００７９】
（オ）１０～２０ｋＤａペプチドの定量
１０～２０ｋＤａペプチド濃度は、上記ＨＰＬＣゲル濾過法における、検量線から決定した分子量１０～２０ｋＤａの範囲である画分３に含まれるタンパク濃度を、製品相当ペプチド濃度（ｍｇ／ｍＬ）に換算して求めた。また、１０～２０ｋＤａペプチド量が全タンパク量の中に占める比率、すなわち１０～２０ｋＤａのペプチド比率は、以下の算出式にて求めた。
【数１】
〔図省略〕
【００８０】
Ｅ：官能評価
サンプル番号１～３（市販品）およびサンプル番号４～８（試醸品）に関して、７名の訓練されたパネラーによって官能評価を実施した。評価項目の指標は、「味のスムーズさ」、「味の持続性」の２項目とし、それぞれ、１（弱い）～９（強い）点の９段階スコアで評価した。各サンプルの分析結果と官能評価結果は表８に示される通りであった。また、後述の実施例３の結果と合わせて図５および図６に図示した。
【００８１】
【表８】
〔図省略〕
【００８２】
表８並びに図５および図６に示される通り、１０～２０ｋＤａのペプチド比率を４．８％より高くし、重合度５～１０のα－グルカンの量を７．１ｍｇ／ｍＬより高くした試験醸造品において、「味のスムーズさ」と「味の持続性」が向上した。
【００８３】
なお、上記結果は、実施例１に記載した方法で分析した時の結果、すなわち、コロナＣＡＤ検出器（コロナ荷電化粒子検出器）を用いて得られた分析値である。本検出器は、物質の化学構造に依存せず、同一の分析条件下で、一貫した物質重量依存の応答性が得られる特徴がある（Thermofisher scientific社による）。
【００８４】
実施例２：α－グルカンおよびペプチドと官能評価の関係評価
市販のビール、発泡酒、新ジャンル飲料など、ビールテイスト発泡性アルコール飲料について、重合度が５～１０のα－グルカン濃度および１０～２０ｋＤａのペプチド濃度と、官能評価との相関係数（Ｒ２乗）を評価した。１０～２０ｋＤａのペプチド濃度の分析方法は実施例１に記載された手順に従って実施した。二つの成分の両方を加味した数値は、重合度が５～１０のα－グルカン濃度（ｍｇ／ｍＬ）と１０～２０ｋＤａのペプチド濃度（ｍｇ／ｍＬ）を乗じたものとして計算した。官能評価は、１０名の訓練されたパネラーによって、「味の調和」、すなわちビールらしさに関わる味の調和を指標として、０～１０の１１段階の幅で、０を全く感じない、１０を評価者の認識の中でこれ以上感じたことがない、として評価した。
【００８５】
重合度５～１０のα－グルカン濃度は、以下のとおり分析した。
（ア）糖類分析用サンプルの調製
ビール製品、試験醸造設備で製造した製品サンプルを計量し、３０％（ｖ／ｖ）アセトニトリル／７０％（ｖ／ｖ）水溶液で５０倍に希釈した物を定量用サンプルとした。
【００８６】
（イ）ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる糖類定量
ＨＰＬＣ条件は下記の通りであった。
使用機器：1200 Series (Agilent technologies社製)
カラム：ACQUITY UPLC BEH Amide 2.1mm×50mm（粒径１．７μｍ）（Waters社製）
移動相Ａ：９５％（ｖ／ｖ）アセトニトリル水＋０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸＋１０ｍＭギ酸アンモニウム
移動相Ｂ：水＋０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸＋１０ｍＭギ酸アンモニウム
注入量：５μＬ
カラム温度：５５℃
サンプル温度：２０℃
グラジェント条件・流速：表９に示すとおりとした。
【００８７】
【表９】
〔図省略〕
【００８８】
（ウ）質量分析器条件の設定
実施例１．Ｃ．（イ）と同様にＧ５～Ｇ１０マルトオリゴ糖を標準品とした検量線で濃度を分析した。購入した標準品は５０％（ｖ／ｖ）アセトニトリル／５０％（ｖ／ｖ）水／０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸／１０ｍＭギ酸アンモニウム溶液を用いて１００ｐｐｍに調整し、ＡＢＳｃｉｅｘ社製３２００Ｑｔｒａｐに直接導入法にて注入し、各種パラメータの最適化を行った。
【００８９】
１０～２０ｋＤａのペプチド濃度分析は、実施例１．Ｄの記載に従って行なった。
【００９０】
重合度５～１０のα－グルカン濃度および１０～２０ｋＤａのペプチド濃度と官能評価結果は表１０に示される通りであった。また、濃度と官能評価結果の関係は図７に示される通りであった。
【００９１】
【表１０】
〔図省略〕
【００９２】
表１０および図７に示される通り、重合度５～１０のα－グルカン濃度、１０～２０ｋＤａのペプチド濃度のそれぞれ単独で、官能評価結果との相関係数を求めたもの（それぞれ、Ｒ２＝０．２９、０．４６）よりも、二つの成分（２成分の濃度を乗じた値）との相関係数の方が高くなる（Ｒ２＝０．５８）ことが明らかとなった。この結果から、重合度５～１０のα－グルカン、１０～２０ｋＤａのペプチドそれぞれ単独ではなく、二つの成分を指標とすることの有効性が確認された。
【００９３】
実施例３：α－グルカン、ペプチドのビールテイスト発酵アルコール飲料への添加と官能評価
Ａ：ペプチド画分の調製
（Ａ－１）ゲル濾過分画
サンプル番号３（市販品）（オールモルトビール）をガス抜きしたうえで凍結乾燥した。乾燥物を１００ｍＭＮａＣｌ溶液に溶解して５倍濃縮液を調製し、分画用サンプルとしたサンプルは、以下の条件にてゲル濾過分画を行った。
【００９４】
＜ゲル濾過分画条件＞
カラム：Ｈｉｌｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ３０ｐｇ２６／６００（ＧＥヘルスケア社）
サンプル注入量：５ｍＬ
溶離液組成：１００ｍＭ ＮａＣｌ
流速：２．５ｍＬ／分（流速一定）
検出波長：２１５ｎｍ
分取：０．２９ＣＶ（カラム・ボリューム）から１９．１ｍＬ（フラクション０）、その後０．３５ＣＶから５ｍＬずつ画分（フラクション１～５１）
【００９５】
分画物の官能評価により、香味の特徴の違いによって、前記表２のようにフラクションをプレ画分、Ａ１、Ａ２、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇの９つのグループに分けた。
【００９６】
（Ａ－２）ペプチド画分の精製
上記（Ａ－１）で得られた画分のうち、Ａ１画分（フラクション番号：Ｆ１～１２）について固相抽出カラム（Ｂｏｎｄ Ｅｌｕｔｅ Ｃ１８ ＥＷＰ）にて吸着処理を行い、脱塩水で洗浄した後、５０％エタノール水溶液にて抽出して、濃縮乾固させて脱塩水で復水し、濃縮液とした。これをペプチド画分とした。
【００９７】
（Ａ－３）Ｌｏｗｒｙ法によるタンパク定量
上記（Ａ－２）のゲル濾過分画によって得られたペプチド画分のタンパク定量は市販キット（ＤＣプロテインアッセイ、Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）を用いたＬｏｗｒｙ法で行った。まず、上記ペプチド画分溶液を対製品で１０倍希釈および４０倍希釈となるように濃度調整し、サンプル５μＬに対し、Ａ液２５μＬを加えて撹拌し、続けてＢ液２００μＬを加えて撹拌した。室温で１５分間発色反応を行った後、７５０ｎｍの吸光度を測定した。得られた吸光度と予め作成した検量線に基づき、ペプチド量を算出した。なお、検量線はＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を用いて作成した。
【００９８】
Ｂ：α－グルカン画分の調製
（Ｂ－１）α－グルカン画分の調製
サンプル番号１（市販品）（オールモルトビール）の糖組成に近づくよう市販マルトオリゴ糖から透析により低分子糖を除去してα－グルカン画分を調製した。透析膜はFloat-A-Lyzer G2（Spectrum Laboratories社）を使用し、オリゴ糖と透析膜のポアサイズは以下の通りであった。
【００９９】
【表１１】
〔図省略〕
【０１００】
各マルトオリゴ糖１ｇをイオン交換水で１０ｍＬになるようにメスアップして溶解し、３０時間透析を実施してα－グルカン画分とした。
【０１０１】
（Ｂ－２）α－グルカンの定量
上記（Ｂ－１）で調製したα－グルカン画分中に含まれるα－グルカンの定量は、実施例１．Ｃ．（イ）に記載の方法に従って高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により実施した。
【０１０２】
（Ｂ－３）α－グルカン画分の糖組成分析
実施例１．Ｃ．（イ）に記載の方法に従ってＨＰＬＣによりα－グルカン画分の糖組成の分析を行なった。結果は下記表１２に示される通りである。
【０１０３】
【表１２】
〔図省略〕
【０１０４】
Ｃ：試飲サンプルの調製
サンプル番号１（市販品）（オールモルトビール）に上記Ａで得られたペプチド画分および上記Ｂで得られたα－グルカン画分を添加し、サンプル番号９～１３（添加品）を調製した。具体的には、１０～２０ｋＤａのペプチド量が０．２５ｍｇ／ｍＬおよび０．３０ｍｇ／ｍＬとなるようにペプチド画分を添加した。同様に、重合度５～１０のα－グルカン量が１１．１ｍｇ／ｍＬおよび１３．１ｍｇ／ｍＬとなるように、α－グルカン画分を添加した。試飲サンプルと、ペプチドの量および比率並びにグルカンの量の対応関係は表１３に記載した。
【０１０５】
Ｄ：官能評価
無添加のサンプル番号１（市販品）と、前記Ｃで得られたサンプル番号９～１３（添加品）について、７名の訓練されたパネラーによって官能評価を実施した。評価項目の指標は、「味のスムーズさ」、「味の持続性」の２項目とし、評価は実施例１．Ｅに記載の方法に準じて実施した。各サンプルの官能評価結果は表１３に示される通りであった。また、先述の実施例１．Ｅの結果と合わせて、図５および図６に図示した。
【０１０６】
【表１３】
〔図省略〕
【０１０７】
表１３並びに図５および図６に示される通り、１０～２０ｋＤａのペプチド比率を４．８％より高くし、重合度５～１０のα－グルカンの量を７．１ｍｇ／ｍＬより高くすることにより、「味のスムーズさ」および「味の持続性」の評価が市販品１に対していずれも向上した。」
「
〔図省略〕
」（図１）
「
〔図省略〕
」（図２）
「
〔図省略〕
」（図３）
「
〔図省略〕
」（図４）
「
〔図省略〕
」（図５）
「
〔図省略〕
」（図６）
「
〔図省略〕
」（図７）
「【図８】
〔図省略〕
」（図８）
（３） 実施可能要件についての判断
明細書等には、「本発明者らは、ビールテイスト発酵アルコール飲料において、特定分子量のペプチドと特定重合度のα－グルカンがビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーの付与や味の持続性に寄与することを見出した。本発明者らはまた、特定分子量のペプチドの比率や特定重合度のα－グルカンの含有量を特定範囲内にすることで、よりビールらしい柔らかくスムーズなテクスチャーや味の持続性が実現できることを見出した。本発明者らはさらに、ビールテイスト発酵アルコール飲料の風味改善に寄与するペプチドを具体的に特定した」（【０００６】）ものであって、「本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料では、全タンパク量に対する分子量１０～２０ｋＤａのペプチド量の比率（ペプチド比率）（好ましくは、ビールテイスト発酵アルコール飲料の原料に由来する分子量１０～２０ｋＤａのペプチド比率）が特定値以上であることを特徴とする」（【００１３】）もので、「本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料ではまた、重合度５～１０のα－グルカンの濃度が特定値以上であることを特徴とする」（【００１６】）ものであり、「ペプチド比率の算出に当たっては、飲料中のタンパク濃度（ｍｇ／ｍＬ）を全タンパク量とし、飲料中の分子量１０～２０ｋＤａのペプチド濃度（ｍｇ／ｍＬ）を分子量１０～２０ｋＤａのペプチド量とすることができる。また、本明細書において「ペプチド比率」の算出の元になるペプチド量は１０～２０ｋＤａの分子量を有する１種または２種以上のペプチドの含有量を合計して算出されるものである。また本明細書においてペプチドの「分子量」はＨＰＬＣゲル濾過法により測定されるもの」（【００１３】）であること、「本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料（特に、麦芽使用比率が５０％以上のもの）において分子量１０～２０ｋＤａのペプチドを所定の比率にするとともに重合度５～１０のα－グルカン濃度を所定の濃度に調整することにより味のスムーズさと味の持続性がより一層増強される」（【００１８】）こと、「本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料は分子量１０～２０ｋＤａのペプチド比率および／または重合度５～１０のα－グルカン濃度が所定値の範囲内に調整される限り、通常のビールテイスト発酵アルコール飲料の製造手順に従って製造することができる」（【００１９】）こと、「本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料の製法において製造飲料中の分子量１０～２０ｋＤａのペプチド比率を所定値の範囲内に調整するためには、例えば、原料である麦芽および／または未発芽の麦類の仕込み・糖化工程におけるタンパク分解を抑制することや、原料である麦芽の製麦工程におけるタンパク分解度を抑制することなどにより、調整することができる」（【００２２】）こと、及び、「本発明のビールテイスト発酵アルコール飲料の製法において製造飲料中の重合度５～１０のα－グルカン濃度を所定値の範囲内に調整するためには、例えば、原料である麦芽および／または未発芽の麦類の仕込みや糖化工程におけるα－グルカン分解を抑制すること、原料である麦芽の製麦工程におけるα－グルカン分解を抑制すること、あるいはα－グルカンの分解度が抑制された液糖を用いることなどにより、調整することができる。」（【００２３】）こと、また、「本発明においてはまた、分子量１０～２０ｋＤａのペプチドを含む原料や、重合度５～１０のα－グルカンを含む原料から、該ペプチドを含む画分や、該α－グルカンを含む画分を調製し、該画分をビールテイスト発酵アルコール飲料に添加することによって、分子量１０～２０ｋＤａのペプチド比率や、重合度５～１０のα－グルカン濃度がそれぞれ所定値の範囲内に調整されたビールテイスト発酵アルコール飲料を製造することができる」（【００２４】）ことが記載され、具体的な参考例や実施例１～３の記載もある。
してみれば、本件特許発明１、２及び８、本件特許発明９、本件特許発明３ないし７は、上記（１）に掲げる実施可能要件における判断基準を充足するものといえる。
（４） 特許異議申立人の主張について
ア 酵素製剤が不明なので実施可能要件を満たさないとの主張について
実施例で利用される「酵素製剤」は「糖化」に利用する酵素製剤であるから、当業者は、主成分は澱粉分解酵素と理解でき、周知の酵素製剤から適宜選択して実施できる。そして、澱粉分解酵素の存在自体はペプチド画分の製造に大きな影響があるとの証拠は示されておらず、通常は大きな影響はないと考えられるから、特許異議申立人の主張は採用できない。
イ 測定精度からみての実施可能要件違反であるとの主張について
（ア） 甲１について
甲１の事案は、Ｍｗ／Ｍｎの測定精度に関するものであり、本件特許発明の発明特定事項であるペプチドの分子量、含量割合、濃度について適用できるとまではいえない。
（イ） 甲２及び明細書等の図８の記載に基づく主張について
甲２の「ＬＴＰ１の分子量が９．７ｋＤａである」の測定方法が不明であり、その値のみを、本件特許発明の「ＨＰＬＣゲル濾過法」の測定に基づく数値と比較することはできない。
また、甲２の分子量を、明細書等の図８の２Ｄ－ＰＡＧＥにおける分子量と比較することは、「ＨＰＬＣゲル濾過法」の測定に基づく数値との比較ではないため、かかる比較には、本件特許発明の「ＨＰＬＣゲル濾過法」の測定精度との直接の関連性はない。
よって、図８での２Ｄ－ＰＡＧＥの分析における分子量と、甲２の、測定方法不明の分子量との値にずれがあることをもって、本件特許発明の「ＨＰＬＣゲル濾過法」に３４％もの測定誤差があるとする特許異議申立人の主張は、採用し難い。
さらに、実施例４の２Ｄ－ＰＡＧＥの分子量やタンパク質同定の記載に多少疑いの余地があったとしても、それは、本件特許発明の、ＨＰＬＣのゲル濾過法で分子量１０～２０ｋＤａと測定されたペプチド画分の製造や使用には直接は関係が無い。
そして、実施可能要件の判断は、上記（２）のとおりであり、実施例４の記載内容及び他の技術常識が、実施例１－３の記載事項（特に、実施例１－３におけるＨＰＬＣゲル濾過法の測定精度）の信頼性を否定するに足るといえないから、本件は記載要件を満たすこととなる。
ウ 「タンパク分解を抑制する条件」が不明であるとの主張について
該主張は、
・「試験醸造６～８からは、同じ製造条件であっても１０～２０ｋＤａペプチド比率は４．９～５．７％の範囲でばらつく」こと
・「本件明細書に記載のされた糖化条件は、従来公知の条件とは実質的に同一」とすること
を根拠とするものである。
以下、該主張について検討する。
（ア） 「試験醸造６～８からは、同じ製造条件であっても１０～２０ｋＤａペプチド比率は４．９～５．７％の範囲でばらつく」ことを根拠とする主張について
試験醸造６～８で「１０～２０ｋＤａペプチド濃度」は０．２６と同じ値であるため、全タンパク量の測定値のばらつきが原因と考えられ、このばらつきに基づき計算すると、試験醸造６～８の全タンパク量の測定値は4.56mg/ml～5.30mg/ml程度となる。
これはLowry法測定とあるが、Lowry法は「測定範囲は0.2-2mg/mLの測定範囲に適している方法」<https://www.chem-station.com/blog/2022/10/pq3.html>であり、その測定範囲は上記の全タンパク量の測定値より低い。
かかるLowry法の測定範囲、及び、明細書等の【００４９】の記載からみて、各分画のタンパク量をそれぞれ測定し、得られた測定値を合算して全タンパク量を算出したと考えるのが自然であり、とすれば、誤差ありの値を複数足すとそれなりのばらつきが出ると考えられるので、「4.56mg/ml～5.30mg/ml」は、通常の測定誤差の範囲内であり、実施可能性に影響するほどのものでないといえる。
（イ） 「本件明細書に記載された糖化条件は、従来公知の条件と実質的に同一」とすることを根拠とする主張について
上記１（２）のとおり、甲３と明細書等の製造方法は、原料及び糖化時の酵素添加の有無の点で異なるから、この主張は、その前提となる判断において誤っているから、採用できない。
（５） 申立理由３についてのまとめ
上記のとおりであるから、申立理由３は、その理由がない。
第５ 結語
以上のとおりであるから、特許異議申立人が提出した特許異議申立書に記載した特許異議申立理由によっては、本件特許の請求項１ないし９に係る特許を取り消すことはできない。
また、他に本件特許の請求項１ないし９に係る特許を取り消すべき理由を発見しない。
よって、結論のとおり決定する。
令和５年３月２３日
審判長 特許庁審判官 平塚 政宏
特許庁審判官 大島 祥吾
特許庁審判官 三上 晶子
出典：特許庁「審決公報」（令和5年4月28日発行・号数2023-004、公報発行サイト https://www.gazette.jpo.go.jp/scciidl010 ）を加工して作成（加工：TaiLexi AI）
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